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技術(shù)文章 / article
ATCC細胞株培養(yǎng)操作
原載自：www.shanyaolaigou.cn[技術(shù)資料頻道] 2017-11-24 瀏覽次數(shù)：2654
ATCC細胞株是用單細胞分離培養(yǎng)或通過篩選的方法，由單細胞增殖形成的細胞群。細胞株的特殊性質(zhì)或標志必須在整個培養(yǎng)期間始終存在。原代培養(yǎng)物經(jīng)傳代成功后即為細胞系(cell line)， 由原先存在于原代培養(yǎng)物中的細胞世系所組成。
ATCC細胞株培養(yǎng)操作：
將凍存的ATCC細胞株從有干冰的包裝中取出，理解復(fù)蘇培養(yǎng)，或迅速轉(zhuǎn)移放置在液氧罐氣相層在——130°C以下的度存儲。
1、先準備好細胞培養(yǎng)皿或細胞株培養(yǎng)瓶，及產(chǎn)品說明推薦的相應(yīng)細胞培養(yǎng)基。并在37°c水浴中預(yù)先溫熱細胞培養(yǎng)基
2、小心取出裝有細胞的凍存管，保持管蓋擰緊，將凍存管蓋一下的部分置于37°C水浴中并輕微的攪拌以幫助解凍。解凍過程應(yīng)該盡快，大約短于2分鐘或待zui后一塊小冰晶體剛?cè)诨?，就?yīng)該將細胞凍存管取出水浴。
3、在從水浴中取出的細胞凍存管表面噴灑70%乙醇配制的消毒劑，用于菌紙巾或紗布試干。之后的操作步驟都應(yīng)該遵循在無菌條件下生物安全柜中嚴格操作。
4、小心擰干凍存管的頂部，將管內(nèi)容物用1MI移槍轉(zhuǎn)移到9毫升培養(yǎng)基的無菌離心管中。離心5到7分鐘（125*g）.小心吸去上清液以去除抗凍劑（二甲基亞砜），避免丟失細胞沉淀。將細胞沉淀重懸于配好的*培養(yǎng)基中。將細胞懸液轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)容器，輕輕搖晃使細胞均勻的分布。生長較慢的細胞株可重懸于5——8mI培養(yǎng)基并轉(zhuǎn)移到T125培養(yǎng)瓶。生長較快的細胞株可重懸于12——20mI培養(yǎng)基并轉(zhuǎn)移到T75培養(yǎng)瓶。
5、將細胞培養(yǎng)容器置于細胞培養(yǎng)箱，在溫度37°C二氧化碳濃度5%的培養(yǎng)條件下進行卵育。細胞培養(yǎng)24小時候后應(yīng)在顯微鏡下觀察細胞株形態(tài)和生長狀況 。
ATCC細胞株是通過選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細胞系中獲得的具有特殊性質(zhì)或標志的培養(yǎng)細胞。從培養(yǎng)代數(shù)來講，可培養(yǎng)到40-50代。細胞株的特殊性質(zhì)或標志必須在整個培養(yǎng)期間始終存在。對于人類腫瘤細胞，在體外培養(yǎng)半年以上，生長穩(wěn)定，并連續(xù)傳代的即可稱為連續(xù)性株或系。
